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Uracil DNA Glycosylase (UDG)
产品信息
|
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
|
Uracil DNA Glycosylase (UDG) |
YB079P |
100 U |
582.00 |
|
Uracil DNA Glycosylase (UDG) |
YB079P |
500 U |
2782.00 |
产品描述
本产品是大肠杆菌（Ecoli）来源的重组尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG），该酶能催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。UDG酶常被用于消除PCR扩增引起的气溶胶污染。
产品组分
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编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
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|
YB079P(100 U) |
YB079P(500 U) |
||
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10304-A |
Uracil DNA Glycosylase (UDG, 1 U/μL) |
500 μL |
|
产品应用
1. 去除含dU的PCR产物气溶胶污染。
2. 去除单链或双链DNA尿嘧啶碱基。
酶活定义
以37℃，30 min内完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定义为1个活性单位（U）。
失活方式
85℃，5 min。
运输储存方法
干冰运输。-20℃保存，有效期一年。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. UDG在多数PCR反应缓冲液中均有活性。
质量控制
核酸内外切酶残留检测：10 U的本酶和0.6 μg λ DNA-Hind III酶切产物37℃下孵育16 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：10 U的本酶和1 μg HeLa细胞总RNA在37℃下孵育1 h，RNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌DNA残留检测：10 U本品经E.coli 16s rDNA特异性的TaqMan qPCR检测，E.coli基因组残留低于10拷贝。
酶失活检测：10 U本品经85℃处理5 min，与1 μg含dU的dsDNA模板温育30 min，DNA的电泳谱带不发生变化。
应用实例
1. 按下列体系配制PCR反应液：
|
组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
|
10×PCR Buffer (Mg2+ Plus) |
5 |
1× |
|
25 mM MgCl2 |
3 |
1.5 mM |
|
dUTP (10 mM) |
1 |
0.2 mM |
|
dCTP / dGTP/ dATP/ dTTP (10 mM each) |
1 |
0.2 mM each |
|
模板DNA |
Optional |
- |
|
引物1 (10 μM) |
2 |
0.4 μM |
|
引物2 (10 μM) |
2 |
0.4 μM |
|
Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
0.5 |
0.05 U/μL |
|
Uracil DNA Glycosylase (UDG, 1 U/μL) |
1 |
1 U/50 μL |
|
ddH2O |
Up to 50 |
|
注：根据实验需要，dUTP终浓度可在0.2-0.6 mM 之间调整。可选择性掺入0.2 mM dTTP。
2. PCR反应：
|
反应温度 |
反应时间 |
循环数 |
目的 |
|
37℃ |
10 min |
1 |
降解含U模板 |
|
94℃ |
2 min |
1 |
UDG酶失活，模板预变性 |
|
95℃ |
30-35 |
变性 |
|
|
60℃ |
20 sec |
退火 |
|
|
30 sec/kb |
延伸 |
||
|
72℃ |
5 min |
1 |
终延伸 |
注：37℃消化反应时间可以根据实验需要在5-10 min内调整。
部门 |
姓名 | 手机 | |||
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