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Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格(元) |
Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶 |
YB080P |
1000U |
936.00 |
产品描述
Alkaline Phosphatase,中文名碱性磷酸酶,可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除,常用于阻止载体的自连作用:在分子克隆实验中,DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在,载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团,因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止,提高了目的片段插入率。另外,碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板,以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶,可以降解几乎所有磷酸单酯,但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。
产品组分
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
YB080P(1000 U) |
||
10321-A |
Alkaline Phosphatase (30 U/μL) |
1000 U |
10321-B |
10×AP buffer |
1 mL |
产品性质
来源(Source) |
携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母 |
质量控制(Quality Control) |
无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染 |
热灭活(Thermal Inactivation) |
在螯合剂存在下,65℃加热30 min,99%活性不可逆丧失;使用苯酚,可使酶完全失活。 |
储存液条件(Storage conditions) |
10 mM Tris-HCl(pH8.0),1 mM MgCl2,50 mM KCl,0.1 mM ZnCl2,50% glycerol. |
活性定义(Unit definition) |
在pH9.8,37℃条件下,以对硝基苯酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物,1分钟生成1 µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。 |
最佳pH(Optimal pH) |
该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10,在底物浓度低时,最佳pH为8,此时该酶活性较高浓度底物时稍低。 |
优化体系(Optimal Buffer) |
AP Buffer(500 mM Tris-HCl pH9.0,10 mM MgCl2) |
运输和保存方法
干冰运输。-20℃保存,本酶在保存条件下极其稳定。
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1 DNA去磷酸化
① 在1.5 mL离心管中加入下列试剂:
组分 |
体积 |
无菌ddH2O |
Up to 50 µL |
DNA 片段* |
1-20 pmol |
Alkaline Phosphatase |
1-2 µL |
10×AP buffer |
5 µL |
【*】单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育,平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。
② 混匀上述试剂,于37℃或50℃孵育30 min。或者37℃孵育15 min后,再于50℃孵育15 min。
2 酚氯仿法抽提DNA
① 苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提2次。
【注】推荐在酚提取前将其在含5 mM EDTA,0.5% SDS,50 μg/mL Proteinase K的溶液中56℃孵育30 min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10 min,灭活效果更佳。
② 氯仿/异戊醇(24:1)抽提。
3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5 µL 3 M NaCl(终浓度150 mM)。
② 加入125 µL(2.5倍体积)预冷乙醇,混匀后于-20℃放置30-60 min,沉淀DNA。
4 溶解DNA
离心,彻底去除乙醇后,将DNA溶于适量去离子水(<20 µL)。
部门 |
姓名 | 手机 | |||
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