Hifair® Ⅴ Multiplex One Step RT-qPCR Probe Mix - qPCR系列 - 分子生物学 - 产品中心 - 上海钰博生物科技有限公司

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Hifair^®Ⅴ Multiplex One Step RT-qPCR Probe Mix是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。本试剂盒利用耐热Hifair^® Ⅴ Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并以此为模板在UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase配合专门针对多重反应优化的Buffer，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多达五重的反应。

本试剂盒以预混液形式提供，2×Hifair^®Ⅴ One Step mRT-qPCR Mix包含优化的缓冲体系，添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	YB017P (50 T)	11146ES70 (200 T)
11146-A	2×Hifair^®Ⅴ One Step mRT-qPCR Mix	500 μL	2 mL
11146-B	RNase free ddH₂O	500 μL	2 mL

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃避光保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

反应体系（以20 μL为例）

组分	体积（μL）	终浓度
2×Hifair^®Ⅴ One Step mRT-qPCR Mix	10	1×
Primer Mix (10 μM)	0.4	0.2 μM
Probe Mix (10 μM)	0.2	0.1 μM
模板 RNA	Total RNA 1 pg-1 μg
RNA Free H₂O	to 20 μL

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a）引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.2μM，也可以根据情况在0.1-1.0μM间进行调整。

b）探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c）模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

d）反应体系：推荐使用20 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e）体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管，推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

f）参比ROX：ROX内参请另外购买Hieff^®50×High Rox（Cat#: 11145-C）或Hieff^®50×Low Rox（Cat#: 11145-D）。

标准扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃a	15 min	1
2	预变性	95℃	30sec	1
3	扩增反应	95℃	10 sec	40
3	扩增反应	60℃b	30 secc	40

【注】

a）逆转录：对于一些复杂模板或者高GC含量的RNA模板，可将逆转录温度调整至55℃，有利于提高扩增效率。

b）扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

c）荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

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产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Hifair^®Ⅴ Multiplex One Step RT-qPCR Probe Mix	YB017P	50 T	1563.00
Hifair^® Ⅴ Multiplex One Step RT-qPCR Probe Mix	YB017P	200 T	5863.00