Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶 - qPCR系列 - 分子生物学 - 产品中心 - 上海钰博生物科技有限公司

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Hieff^® Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’ →5’外切酶活性的蛋白组成的混合酶，其保真性是Taq DNA Polymerase的6倍，专门用于长片段的扩增。独特的缓冲体系使Hieff^® Long Taq DNA Polymerase可扩增长达8 kb的人基因组片段和10 kb左右的质粒模板。PCR扩增产物的3’端带A，可直接用于TA克隆。试剂盒中的PCR Enhancer有助于高GC含量片段的扩增。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	YB028P（125 U）	YB028P（5×125 U）
10107-A	Hieff^® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	25 μL	25 μL×5
10107-B	10× Hieff^® Long Taq Buffer（Mg²⁺ free）	500 μL	500 μL×5
10107-C	25 mM MgCl₂	1 mL	1 mL×5
10107-D	dNTP Mix (10 mM each)	100 μL	100 μL×5
10107-E	5 × PCR Enhancer	125 μL	125 μL×5
10107-F	10 × Loading buffer	1.25 mL	1.25 mL×5

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃, 30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

质量控制

核酸外切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和1 μg λDNA -HindIII，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中，加入2 U本品，以无菌ddH₂O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

运输与保存方法

冰袋运输。-20º℃保存，有效期1年。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

PCR反应体系（推荐冰上配制）

组分	体积
ddH2O	to 50 μL
10× Hieff® Long Taq Buffer（Mg2+ free）	5 μL
25 mM MgCl2	3-4 μL
dNTP Mix (10 mM each)	1 μL
5 × PCR Enhancer	适量
DNA模板	适量
Primer正向 (10 μM)	2 μL
Primer反向 (10 μM)	2 μL
Hieff® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5 μL

【注】：

1）PCR Enhancer：推荐仅当扩增片段GC%> 60%且优化条件也无法正常扩增时用；可能会使保真度有轻微降低。
2）聚合酶浓度：酶量可在0.25-1 μL之间调整。通常情况下加大酶量可以提高扩增产量，但有可能会使特异性下降。
3）Mg2+终浓度：对于大多数由本酶催化的PCR反应来说，Mg2+的最优浓度为2 mM；如有特殊需要，可在终浓度1.5-2.5 mM区间内调整Mg2+浓度。
4）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）

模板种类	用量
动植物基因组DNA	10-200 ng
大肠杆菌基因组DNA	1-100 ng
λDNA、质粒DNA	0.1-10 ng

PCR扩增程序

1）目的片段＜5 kb

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	5 min	1
变性	94℃	30 sec	30-35
退火	55℃	30 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	7 min	1

【注】:退火温度需要根据引物退火温度调整，一般设置成低于引物退火温度1-2℃即可。

2）目的片段＞5 kb

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	1-3 min	1
变性	94℃	10 sec	30-35
退火/延伸	68℃	30-60 sec/kb	30-35
终延伸	68℃	7 min	1

【注】:对于> 5 kb的片段，推荐使用长引物， Tm值在68-70℃，把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性。延长延伸时间有助于提高扩增产量。

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产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶	YB028P	125 U	155.00
Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶	YB028P	5×125 U	735.00
Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶	YB028P	5000U	4563.00