2×Hieff™ HotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye) - qPCR系列 - 分子生物学 - 产品中心 - 上海钰博生物科技有限公司

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2×Hieff^TMHotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye)是即用型的PCR预混合溶液，含有HieffTM HotStart Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化了实验的操作步骤，可以高通量操作并提高实验结果的重现性。HieffTM HotStart Taq DNA Polymerase是经过配体修饰的热稳定 Taq DNA Polymerase，该配体可以随温度变化来调节 DNA 聚合酶活性。在室温下酶活性被完全封闭，经 95℃加热后活性才被释放。HieffTM HotStart DNA Polymerase 的激活时间只需要 2-3 min，兼容现有的 PCR 程序。本产品防止了在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增，可以有效地进行基因分型实验。

产品应用

本产品主要应用于小鼠基因型鉴定。

质量控制

核酸外切酶残留检测：20 μL本品和0.6 μg λDNA -HindIII，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测：20 μL本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中，加入25 μL本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

PCR反应体系（50 μL）

组分	体积	终浓度
ddH2O	to 50 μL	-
模板DNA	适量	-
Primer正向 (10 μM)	2 μL	0.4 μM
Primer反向 (10 μM)	2 μL	0.4 μM
2×HieffTM HotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye)	25 μL	1×

【注】：针对不同模板的最佳反应浓度有所不同，下表为50 μL反应体系推荐模板使用量，仅供参考。

模板种类	模板使用量
基因组DNA	50 ng-100 ng
质粒DNA	100 pg-20 ng
cDNA	1-5 μL (不超过反应体系的1/10)

PCR扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min	1
变性	95℃	30 sec	35
退火	50-60℃	30 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	10 min	1

【注】：

1）退火温度和时间：退火温度推荐使用50-60℃。退火时间推荐设置为30 sec，可以在20-30 sec内调节。可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度和时间。

2）延伸温度和时间：温度推荐使用72℃。时间推荐使用30-60 sec/kb。

3）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。

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产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
2×HieffTM HotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye)	YB029P	1 mL	-20℃	75.00
2×HieffTM HotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye)	YB029P	5×1 mL	-20℃	345.00

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