2×Hieff UNICON® HotStart PCR Master Mix (With Dye)

产品信息

产品描述

2×Hieff UNICON^® HotStart PCR Master Mix (With Dye)是即用型的PCR预混合溶液，含有Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化了实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase是Hieff UNICON® Taq抗体和Hieff® Taq DNA Polymerase的混合产品。Hieff UNICON® Taq抗体与Hieff® Taq DNA Polymerase具有很高的亲和力，高温50℃处理30 min，依旧可以封闭Hieff® Taq DNA Polymerase的活性。Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase在预变性温度下加热30 sec完全失活，释放出DNA聚合酶活性。使用该热启动taq酶可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。

预混液中已加入电泳缓冲液和染料，使得PCR产物可以直接进行电泳，染料的存在不会干扰扩增效率。PCR产物具有3’-dA突出端，可轻松克隆至T载体。

产品应用

低拷贝基因扩增、基因型鉴定、菌落PCR

质量控制

核酸外切酶残留检测：20 μL本品和0.6 μg λDNA -HindIII，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测：20 μL本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中，加入25 μL本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

PCR反应体系（50 μL）

【注】：针对不同模板的最佳反应浓度有所不同，下表为50 μL反应体系推荐模板使用量，仅供参考。

PCR扩增程序

【注】：
1）退火温度和时间：温度推荐使用50-60℃。退火温度过低会导致非特异性扩增。引物设计参考荧光定量引物标准。推荐退火时间设置为30 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度和时间。

2）延伸温度和时间：温度推荐使用72℃。时间推荐使用30 sec/kb。

  3）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。