Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase（抗体法热启动Taq酶） - qPCR系列 - 分子生物学 - 产品中心 - 上海钰博生物科技有限公司

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Hieff UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase是Hieff UNICON^® Taq抗体和Hieff^® Taq DNA Polymerase（货号：10101ES）的混合产品。Hieff UNICON^® Taq抗体与Hieff^® Taq DNA Polymerase具有很高的亲和力，高温50℃处理30 min，依旧可以封闭Hieff^® Taq DNA Polymerase的活性。本品在预变性温度下加热30 sec完全失活，释放出DNA聚合酶活性。使用该热启动taq酶可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。

Hieff UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase适用于热启动PCR和qPCR。本品中的Hieff^® Taq DNA Polymerase是热稳定重组型DNA聚合酶，具有较高的模板亲和力，非常适合低拷贝模板的扩增。扩增产物具有3′-dA，可轻松克隆用于T载体。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	YB033P（100 U）	YB033P（500 U）	YB033P（3000 U）
10113-A	Hieff UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	20 μL	100 μL	600 μL
10113-B	2×Hieff UNICON^® HotStart Taq Buffer（含Mg²⁺、dNTP）	1 mL	1 mL×5	1 mL×30

产品应用

低拷贝基因扩增、基因型鉴定

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

质量控制

DNA聚合酶活性封闭性检测：在1×Hieff UNICON^® HotStart Taq Buffer (Mg²⁺ Plus)中，65℃孵育30 min，活性释放低于5%。

DNA聚合酶活性释放检测：在1×Hieff UNICON^® HotStart Taq Buffer (Mg²⁺ Plus)中，95℃加热30 sec，活性释放高于95%。

核酸外切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和0.6 μg λ-HindIII，74℃孵育1 h，DNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA，74℃孵育1h，DNA电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测：50 μL体系中，加入2 U本品，以无菌ddH₂O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。

PCR反应体系（50 μL）

组分	体积	终浓度
ddH₂O	to 50 μL	-
2×Hieff UNICON^® HotStart Taq Buffer（含Mg²⁺、dNTP）	25 μL	1×
模板DNA	适量	-
Primer正向 (10 μM)	2 μL	0.4 μM
Primer反向 (10 μM)	2 μL	0.4 μM
Hieff UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5 μL	2.5 U/50 μL

【注】：

1）试剂使用：各组分使用前需充分融化混匀。

2）聚合酶浓度：推荐使用2.5 U/50 μL。可以在1.25-5 U/50 μL之间进行优化。

3）Mg²⁺终浓度：体系终浓度为2 mM。如有特殊需要，可用25 mM MgCl₂，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。

4）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：

模板种类	模板使用量
基因组DNA	50 ng-200 ng
质粒DNA	100 pg-20 ng
cDNA	1-5 μL (不超过反应体系的1/10)

PCR扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	1 min	1
变性	95℃	10 sec
退火	60℃	20 sec	35-40
延伸	72℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	10 min	1

1）退火温度和时间：温度推荐使用50-60℃。退火温度过低会导致非特异性扩增。引物设计参考荧光定量引物标准。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。

2）延伸温度和时间：温度推荐使用72℃。时间推荐使用30 sec/kb。

3）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。

4）扩增程序：本产品用于定量实验，可使用2步法程序扩增，去掉延伸步骤，退火和延伸合为一步，对应的时间常用30 sec或根据仪器型号设置，如Applied Biosystems 7300需用31 sec以上。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

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产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Hieff UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase（抗体法热启动Taq酶）	YB033P	100 U	216.00
Hieff UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase（抗体法热启动Taq酶）	YB033P	500 U	656.00
Hieff UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase（抗体法热启动Taq酶）	YB033P	3000 U	3665.00

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