Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 - qPCR系列 - 分子生物学 - 产品中心 - 上海钰博生物科技有限公司

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Hieff Canace^® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了独特的延伸因子，扩增速度达到15 sec/kb。本产品配备了优化后的酶缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性，非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。

产品组分

编号	组分	产品编码/规格
编号	组分	YB034P （10 U）	YB034P （100 U）	YB034P （500 U）	YB034P （1000 U）
10135-A	Hieff Canace^® High-Fidelity DNA Polymerase（2 U/μL）	5 μL	50 μL	250 μL	2×250 μL
10135-B	2×Canace^® PCR buffer (含Mg²⁺，dNTPs)	300 μL	3×1 mL	15×1 mL	30×1 mL

产品应用

基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

质量控制

核酸外切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和1 μg λDNA –Hind III，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测：50 μL体系中，加入2 U本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

PCR反应体系（推荐冰上配制）

组分	体积	终浓度
ddH₂O	to 50 μL	-
2×Canace^® PCR buffer (含Mg²⁺，dNTPs)	25 μL	1×
DNA模板	适量	-
Primer正向 (10 μM)	2.5 μL	0.5 μM
Primer反向 (10 μM)	2.5 μL	0.5 μM
Hieff Canace^® High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL)	0.5 μL	1 U/50 μL

注：

1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀。

2）聚合酶浓度：推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化，请勿超过2 U/50 μL。

3）聚合酶添加：为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。

4）Mg2+终浓度：体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。

5）高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。

6）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：

模板种类	扩增片段1 kb-20 kb
基因组DNA	50 ng-200 ng
质粒或病毒DNA	10 pg-20 ng
cDNA	1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10)

PCR扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	0.5-3 min	1
变性	98℃	10 sec	30-35
退火	60℃	20 sec
延伸	72℃	15-30 sec/kb
终延伸	72℃	5 min	1

注：

1）预变性温度和时间：推荐使用98℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。

2）退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3）延伸温度和时间：推荐使用72℃。延伸时间推荐如下：质粒DNA等简单模板为15 sec/kb；cDNA、基因组DNA等复杂模板为30 sec/kb，根据实际情况可延长至40 sec/kb。

4）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端，产物直接用于克隆，请使用平末端连接载体。

应用实例

图1： Hieff Canace® 高保真DNA聚合酶扩增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可实现高特异性、高产量扩增。模板：拟南芥基因组DNA，50 ng/50 μL；退火温度：60℃；延伸时间：30 sec/kb。M：1 kb ladder；1：2.1 kb；2：3.1 kb；3：4.2 kb；4：5 kb；5：6 kb。

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产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶	YB034P	10 U	96.00
	YB034P	100 U	626.00
	YB034P	500 U	2356.00
	YB034P	1000 U	4256.00