2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真酶预混液

产品信息

产品描述

2× Hieff Canace^® PCR Master Mix是即用型2×预混合溶液，包含Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系。Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶，具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。扩增速度可达15 sec/kb。适用于复杂模板的扩增，扩增产物为平末端。

2× Hieff Canace® PCR Master Mix具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，反应体系只需加入引物和模板即可进行扩增，简化了实验操作步骤，减少了人为误差，提高了实验通量和结果的重复性。本产品中不含染料，PCR产物需加入Loading buffer 后进行电泳。另外，该产品还含有特异保护剂，使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。

产品应用

基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。

质量控制

核酸外切酶残留检测：20 μL本品和0.6 μg λDNA -Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测：20 μL本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测：50 μL体系中，加入25 μL本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

推荐PCR反应体系（冰上配制）

【注】： 1）聚合酶终浓度：在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。

2）引物：PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM，推荐0.5 μM。

3）Mg²⁺、dNTP终浓度：在1×预混液含有1.5 mM Mg²⁺和200 μM的dNTP。

4）高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。

5）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：

PCR扩增程序设置

【注】：1）预变性温度和时间：推荐使用98℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。

2）退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3）延伸温度和时间：推荐使用72℃。延伸时间推荐如下：质粒DNA等简单模板为15 sec/kb；cDNA、基因组DNA等复杂模板为30 sec/kb，根据实际情况可延长至40 sec/kb。

4）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端，产物直接用于克隆，请使用平末端连接载体。

应用实例

图1： Hieff Canace^® 高保真PCR预混液扩增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可实现高特异性、高产量扩增。模板：拟南芥基因组DNA，50 ng/50 μL；退火温度：60℃；延伸时间：30 sec/kb。M：1 kb ladder； 1：2.1 kb；2：3.1 kb；3：4.2kb；4：5 kb；5：6 kb。