Hieff Canace® Gold High Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 - qPCR系列 - 分子生物学 - 产品中心 - 上海钰博生物科技有限公司

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Hieff Canace^®Gold High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了热启动因子，极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增速度达到15 sec/kb，扩增目的片段的长度可长达10 kb。本产品配备了优化缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。

产品组分

编号	组分	产品编码/规格
编号	组分	YB036P （10U）	YB036P （100U）	YB036P （500U）	YB036P （1000U）
10148-A	Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL)	5 μL	50 μL	250 μL	250 μL×2
10148-B	2×Canace® Gold PCR buffer（含Mg2+，dNTPs）	300 μL	1 mL×3	1 mL×15	1 mL×30

产品应用

基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1 U。

质量控制

核酸外切酶残留检测：20 μL反应体系，10U本品和1 μg λDNA –Hind III，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测：50 μL体系中，加入2 U本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

推荐PCR反应体系（冰上配制）

组分	体积	终浓度
ddH2O	to 50 μL	-
2×Canace® Gold PCR buffer (含Mg2+，dNTPs)	25 μL	1×
DNA模板	适量	-
Primer正向 (10 μM)	2.5 μL	0.5 μM
Primer反向 (10 μM)	2.5 μL	0.5 μM
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase(2 U/μL)	0.5 μL	1 U/50 μL

【注】： 1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀。

2）聚合酶浓度：推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化，请勿超过2 U/50 μL。

3）聚合酶添加：为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
4）Mg2+终浓度：体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。

5）高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。

6）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：

模板种类	扩增片段1 kb-10 kb
基因组DNA	50ng-200 ng
质粒或病毒DNA	10pg-20 ng
cDNA	1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10)

PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。

两步法程序（优先推荐）：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	30-35
延伸	68℃	30 sec/kb	30-35
终延伸	72℃	5 min	1

三步法程序（常规程序）：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	30-35
退火	60℃	20 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	5 min	1

梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）:

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	15，每个循环降低1℃
梯度退火	70-55℃	20 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
变性	98℃	10 sec	20
正常退火	55℃	20 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	5 min	1

【注】：1）预变性温度和时间：推荐温度：98℃，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。

2）退火温度和时间：推荐温度：60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3）延伸温度和时间：推荐温度：72℃。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。

4）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。

5）不同扩增程序下的特点：

程序类型	两步法	三步法	梯度退火
速度	最快	中等	慢
特异性	高	中等	高
PCR产量	中等	最高	中等
检出率	高	中等	高

部门

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产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶	YB036P	10 U	103.00
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶	YB036P	100 U	683.00
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶	YB036P	500 U	2383.00
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶	YB036P	1000 U	4583.00

抗体（仅供科研使用）

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二抗

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