2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液 - qPCR系列 - 分子生物学 - 产品中心 - 上海钰博生物科技有限公司

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2×Hieff Canace^® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液是即用型2×预混合溶液，包含Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系。预混液中添加了Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase的热启动因子，极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达10 kb，该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。扩增速度可达15 sec/kb。适用于复杂模板的扩增，扩增产物为平末端。

2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，反应体系只需加入引物和模板即可，并可以通过两步法的程序进行扩增，简化了实验步骤，节省了时间。本产品中不含染料，PCR产物需加入Loading buffer后进行电泳。另外，该产品还含有特异保护剂，使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。

产品应用

基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。

质量控制

核酸外切酶残留检测：20 μL本品和0.6 μg λDNA -Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测：20 μL本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测：50 μL体系中，加入25 μL本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。

注意事项

1）解冻后Master Mix可能出现晶体沉淀，使用前务必涡旋振荡混匀至沉淀消失，不影响试剂性能。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

推荐PCR反应体系（冰上配制）

组分	体积	终浓度
ddH2O	to 50 μL	-
DNA模板	适量	-
Primer正向 (10 μM)	2.5 μL	0.5 μM
Primer反向 (10 μM)	2.5 μL	0.5 μM
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix	25 μL	1×

【注】： 1）聚合酶终浓度：在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。

2）引物：PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM，推荐0.5 μM。

3）Mg2+、dNTP终浓度：在1×预混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。

4）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：

模板种类	扩增片段1 kb-10 kb
基因组DNA	50 ng-200 ng
质粒或病毒DNA	10 pg-20 ng
cDNA	1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10)

PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。

两步法程序（优先推荐）：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	30-35
延伸	68℃	30 sec/kb	30-35
终延伸	72℃	5 min	1

三步法程序（常规程序）：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	30-35
退火	60℃	20 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	5 min	1

梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）:

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	15，每个循环降低1℃
梯度退火	70-55℃	20 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
变性	98℃	10 sec	20
正常退火	55℃	20 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	5 min	1

【注】：1）预变性温度和时间：推荐温度：98℃，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。

2）退火温度和时间：推荐温度：60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3）延伸温度和时间：推荐温度：72℃。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。

4）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。

5）不同扩增程序下的特点：

程序类型	两步法	三步法	梯度退火
速度	最快	中等	慢
特异性	高	中等	高
PCR产量	中等	最高	中等
检出率	高	中等	高

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产品名称	产品编号	规格	价格（元）
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液	YB037P	100 μL	93.00
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液	YB037P	1 mL	553.00
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液	YB037P	5×1 mL	1453.00

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新产品（仅供科研使用）