Taq DNA连接酶（Taq DNA Ligase）

产品信息

产品描述

Taq DNA Ligase是一种耐高温连接酶，它能催化与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5´-磷酸和3´-羟基之间形成磷酸二酯键。该催化反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对，且两条寡核苷酸链之间没有间隙的条件下才会发生。因此，可以用它来检测单碱基替换。Taq DNA连接酶以NAD+为辅酶因子，在45℃-65℃范围内均有活性。

产品组分

来源

重组E. coli 菌株，含有从Thermus aquaticus HB8中克隆的连接酶基因。

产品应用

1）用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测；

2）通过PCR扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变；

3）同源重组。

单位定义

在50 μL 反应体系中，45℃条件下，孵育15 min能使50%的1 μg经BstEII消化的λDNA片段（12 bp粘性末端）发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制

核酸内切酶活性：在50 μL反应体系中，10 μL酶溶液与0.5 μg pENZuC DNA作用，37℃孵育4 h，经琼脂糖凝胶电泳，无肉眼可见的环状切口DNA出现。

核酸外切酶活性：在50 μL反应体系中，10 μL酶溶液和10000 cpm/μg放射性标记的DNA作用，37℃孵育4 h，溶液中可溶性TCA的释放量小于5.0%。

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存。长时间（大于30天）保存时，缓冲液应于-80℃保存。

使用方法

1）反应体系配制：

2）反应条件：45℃温育15 min。加入终止染液（50%甘油，50 mM EDTA和溴酚兰）终止反应。

注意事项

1）10×Taq DNA Ligase Buffer中含有辅酶因子NAD+，为了延长NAD+的半衰期，Buffer应于-80℃储存；

2）Taq DNA Ligase不能替代T4 DNA ligase；

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。