两管式RT-PCR试剂盒（MMLV-Taq）

英文名称：

运输：低温

保存：负20℃

有效期：1年

货期：1-2天

其他：

产品介绍：

先cDNA合成，再qPCR

本试剂盒是整合cDNA第一链合成试剂和即用型PCR 试剂而得的RT-PCR试剂盒。cDNA第一链合成反应和PCR反应分别在两个离心管中进行。
产品特点：
1. 即开即用，足够50次RT反应(20μL体系)和600次PCR反应(30μL体系)。
2. cDNA第一链合成试剂盒可灵活选用随机引物、Oligo dT引物或基因专一引物，适合各种情况。
3. PCR试剂盒具有即用、简单等优点，PCR mix中含上样染料，所以PCR产物可以直接上样电泳。
4. 两管式操作，RT和PCR在不同试管中进行，便于单独优化RT反应或PCR反应条件。
5.扩增效率高，最长可扩增5Kbp以上的RNA。
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
一、样品RNA的制备(本试剂盒不提供相关试剂)
1、可用自本公司各种RNA提取方法提取样品的RNA，也可以选用其他供应商的产品，但得到的RNA一定要溶解在RNase-free的超纯水中。
二：RT(逆转录)反应合成cDNA
注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。随机引物与RNA 模板的比例将决定cDNA 合成的平均长度(成反比)。一般情况下随机引物效率好于OligodT引物，但如果只想转录总RNA中的mRNA(只占5%左右)，则可优先选用OligodT引物，这样就可以排除非mRNA的干扰。
2. 70℃保温5分钟变性模板后立即冰浴。
3. 按顺序加入6μL RT Buffer(含dNTP)和2μL MMLV 逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μl。
4. 42℃保温60分钟。此步为RT反应。
5. 70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。
6. 合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用，不需要纯化。剩余样品可以放置在-20℃长期保存。
三、PCR(30μL体系)
1、将全部专用染料加入到PCR MagicMix 3.0中，轻柔颠倒混匀即可使用。未用完的部分需要在-20℃。也可以不加专用染料，但在PCR结束后，电泳上样前，则需要加入电泳上样液，否则电泳时没法判断电泳速度。
注意：cDNA 也可以稀释后用作PCR 模板。是否稀释或稀释多少倍完全取决于靶基因的丰度。
3、PCR反应参数(需要根据模板和引物决定，下面的只做参考)：
四、电泳检测
取5-0μl PCR产物直接在PAGE或琼脂糖凝胶上电泳，跟分子量标准比较估计出扩增产物的大小。
注：本试剂盒中的PCR mix含有甘油和染料，可以直接上样，不需要额外再加电泳上样液。