Taq DNA聚合酶，5U/uL

产品及特点 本产品是 Thermus aquaticus（水生栖热菌）的 DNA 聚合酶基因在 E.coli 中表达而得,具有以双链 DNA 为模板的 5'→3'聚合酶活性和 5'→3'外切酶活性。Taq DNA 聚合酶长为 832 个氨基酸，分子量为 94 Kd。该酶可以广泛用于 PCR，RT-PCR，加尾反应等。

1. 耐热 DNA 聚合活性，该酶在 90℃以上几乎无 DNA 合成，在 75～80℃时延伸率约 150 个核苷酸，70℃时为 60 个核苷酸/秒，55℃时为 24 个核苷酸/秒。在 65～68℃并有 Mn2+存在时还具有逆转录活性。

2. 热稳定，在 PCR 混合物中 95℃保温 40 分钟仍可保持 50%的活性。

3. Mg2+离子依赖性，MgCl2浓度在 2.0 mM 时该酶催化活性最高。

4. 本酶无 3'→5'外切活性，不具 3'→5'校对功能，碱基错配机率为 2.1×10-4。

规格及成分 成 份 编 号 500 U 包装（51206-500）

5000 U 包装（51206-5000）

Taq DNA 聚合酶(5 U/μL)

51206A 100 uL（红盖） 1 mL（红盖）

10×PCR Buffer(含 Mg2+)

51206B 1 mL（绿盖） 10 mL（瓶）

MgCl2，25 mM 51206C 1 mL（黄盖） 1 mL（黄盖）

使用手册 51206sc 1 份 1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法 以λ DNA 为模板进行 PCR 扩增反应为例

1.按下列组份配制 PCR 反应液。

Taq DNA 聚合酶(5U/ uL) 0.25 uL

10×PCR Buffer(含 Mg2+) 5 uL

MgCl2

(25 mM) 根据需要补加

自备 dNTP（各 2.5 mM） 4 uL

模板 DNA 见下

引物 1（20 uM） 1 uL

引物 2（20 uM） 1 uL

灭菌蒸馏水 Up to 50 uL

注：10×PCR Buffer 含 15 mM MgCl2

(在 PCR 体系中的终浓度为

1.5 mM），是否需要补加 MgCl2 根据实验决定。但一般不需要补加。

推荐 50 uL PCR 反应体系中模板 DNA 推荐使用量

哺乳动物基因组 DNA 0.5-1 ug

酵母基因组 DNA 5-500 ng

细菌基因组 DNA 0.5-50 ng

质粒 DNA 5-500 pg

PCR 回收片段 1-100 pg

2.PCR 反应条件

以λDNA 为模板，扩增 1 kbp 的 DNA 片段的 PCR 反应条件如下：

94℃ 30 sec.

55℃ 30 sec. 30-35cycles

72℃ 1 min.

注：PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。

注意事项

PCR 的反应液请在冰中配制，然后置于 PCR 反应仪上进行 PCR 反应。这种冷启动法（Cool Start Method）可增强 PCR 扩增的特异性，减少 PCR 过程中的非特异性反应，能得到良好的 PCR 结果。