热启动Taq DNA聚合酶（化学修饰法）

产品及特点 热启动 Taq DNA 聚合酶设计用于增强 DNA 扩增的特异性、敏感性和产量。使用该酶可在室温配制反应体系，使用非常方便。本产品是一种基于化学修饰法的重组热启动 Taq DNA 聚合酶，蛋白分子氨基酸残基上增加了热不稳定的封闭基团。该酶在室温下没有活性，避免形成引物二聚体和非特异性延伸。从而增加 DNA 扩增的特异性。95℃加热 4 分钟可恢复酶活性。活化的酶具有与热启动 Taq DNA 聚合酶相同的功能：催化 5’→3’方向合成DNA、无可检测的 3’→5’校正外切酶活性、具有较低的 5’→3’外切酶活性。该酶还具有脱氧核糖核酸酶转移活性，在 PCR 产物的 3’-端多加 1个腺嘌呤。活化前检测不到这些活性。此产品特点是：

1. 高产量扩增复杂模板。

2. 不需要 95℃加热 4 分钟即可激活酶活性。

3. PCR 特异性高-降低错配效应和减少引物二聚体的生成。

4. 增强的 PCR 敏感性。

5. 使用方便，室温配制 PCR 反应体系。

6. 扩增产物具有 3’-dA 突出末端。 规格及成分 成 份 100 U 包装 500U 包装热启动 Taq DNA 聚合酶（2.5 U/μL） 40 μL 200 μL

10×反应 Buffer 1 mL 1 mL

使用手册 1 份 1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。 使用举例 注意：以下举例为常规 PCR 反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物长短等具体情况，设定最佳反应条件。10×HotMaster Taq Buffer 中含有Mg2+，配有浓度为 15 mM MgCl2 。实际 PCR 反应可因模板等的不同酌情向反应体系中添加适量的 Mg2+ ，设置最佳的反应体系。该酶最适延伸温度为 65℃，可在 60℃-70℃之间调整。以人基因组 DNA 为模板，护增 1kb 的片段

1. 反应体系的建立：50μL 反应体系如下（可根据比例放大或缩小反应体系）：

Template ＜1μg

Primer 1（10 μM） 1μl

Primer 2（10 μM） 1μl

10×Hot Start Taq Buffer 5μl

dNTP Mixture（2.5 mM） 4μl

Hot Start Taq DNA 聚合酶（2.5U/μl） 0.5-1μl

ddH2O 补至 50μL

2. PCR 反应循环的设置：

94℃ 2 min

94℃ 20 sec

55℃ 20 sec

65℃ 1 min

65℃ 5min

3. 结果检测：反应结束后取 5 μl 反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。 应用

1. 启动 PCR。

2. 高产量扩增长达 3kb 片段。

3. RT-PCR

4. 特异性扩增复杂 cDNA 和基因组模板。

5. 扩增低拷贝 DNA 模板。

6. 实时 PCR。

7. 多重 PCR。

8. 制备 TA 克隆用 PCR 产物。