2XLAMP MagicMix(无色）

产品及特点 本产品是 2×LAMP MagicMix（无色），可以用于 LAMP 等温扩增，LAMP 即Loop-Mediated Isothermal Amplification（环介导等温扩增），是 2000 年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用 4 条模板专一的特异引物和具有链置换能力的 DNA 聚合酶，在等温条件下(63℃左右) 30－60 分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于 PCR 技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、等过程。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。本试剂盒具有下列特点：

1. 即开即用的 2×LAMP MagicMix，无色。

2. 高特异性，由于同时使用 4-6 条特异引物，所以特异性比 PCR 更高。

3. 高扩增效率，扩增效率可达到 10E9-10E10，比PCR 灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的 DNA 分子

4. 65℃左右等温扩增，可以不需要贵重的热循环仪。

5. 即开即用，包含了除引物和模板 DNA 外的所有成份，十分方便。

6. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的 LAMP 扩增。

7. 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。

8. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

规格及成分 成 份 编 号 热封袋包装
2×LAMP MagicMix（无色） 190601a 500 uL（绿色盖）
LAMP 阳性对照模板-引物混合物 130923a 45 uL（黄色盖）
使用手册 190601sc 1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂 LAMP 模板、LAMP 引物、自备可见光染料

使用方法 1. 制备模板DNA：选用合适的方法制备模板DNA。

2. 配制自备的5×LAMP引物混合液。先加超纯水或自备TE缓冲液将自备的下列6种（或4种）引物干粉稀释到母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液，此混合液足够250次20uL体系的LAMP扩增。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积异于1mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年。引物名称 母液浓度 加母液量

在 5×LAMP 引物

混合液中的浓度

FIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

BIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

F3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

B3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

Loop F 100 uM 20 uL 2 uM

Loop B 100 uM 20 uL 2 uM

超纯水 780 uL

如果没有 Loop 引

物，则用水替代

终体积 1 mL

3. 在冰上融化2×LAMP MagicMix，混匀，稍离心。如果有N个样品，则在

N+2个反应管中加入以下组份：

成份 样品管 LAMP

阳性对照

LAMP

阴性对照

2×LAMP MagicMix（无色） 10 uL 10 uL 10 uL

自备 5×LAMP 引物混合液 4 uL 不加 4 uL

自备模板 DNA 1-100ng 不加 不加

LAMP 阳性对照模板-引物混合物 不加 4 uL 不加

补自备超纯水到 20 uL 20 uL 20 uL

注意：此步可加入自备的各种LAMP可视化染料，这样反应结束后可以根据反应液的颜色变化或实时荧光强度变化来判断是否有扩增，不需要开盖，避免污染。如果加入了荧光染料，则需要在荧光定量PCR仪上进行反应和实时检测。

4. 混匀，置于63℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴或水浴保温，没有热盖，必须覆盖50uL的石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。

5. 产物取扩增产物5 uL上样，进行2-3%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱。

6. 结果分析：如果本试剂盒提供的阳性对照-引物混合物能够扩增而阴性对照不能扩出，则实验有效。如果阳性对照-引物混合物没有扩增出条带，则试
剂盒的问题，请跟厂家联系。如果阴性对照（水作为模板）有扩增出条带，则说明LAMP样品或试剂有过去的扩增产物的污染，需要注意操作的规范性，如果不能解决，可以重新设计引物扩增新的靶片段。也可以使用不需要开盖的2×可视化LAMP MagicMix。