可视化LAMP试剂盒

本试剂盒是本公司通用型 LAMP 试剂盒的升级版，它有下列特点：

1. 将可视化 LAMP 染料和 Bst DNA 聚合酶整合到 2×LAMP MagicMix 中，减少了加样操作，能降低操作误差。

2. 变色式可视化肉眼检测，不需要任何仪器即可肉眼判断是否有扩增。

3. 使用改良的温热启动 Bst DNA 聚合酶，该酶只有在 40℃以上时才有活性，反应特异性更强。

4. 改良的酶既可用于 DNA 为模板的 LAMP 扩增，也可用 RNA 模板的RT-LAMP 扩增。

5. 高扩增效率更高，比 PCR 灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的 DNA 分子。

6. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的 LAMP 扩增，只可用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，免 DNA 提取试剂可以常温保存。有效期一年。本试剂盒中的 2×可视化 LAMP MagicMix 由于含有 Bst DNA 聚合酶，故不能反复冻融超过 10 次。如果需要反复冻融 10 次以上，建议收到货后立即分装，一次用其中一管，减少冻融次数。
规格及成分 成 份 编 号 十孔盒包装
2×可视化 LAMP MagicMix 180601a 500 uL（绿盖）
LAMP 阳性对照模板-引物混合物 130923a 45 uL（黄盖）
超纯水 100935 1 mL（蓝盖）
使用手册 180601sc 1 份
免费赠送免 DNA 提取试剂盒试用装，足够处理 30 个样品。
成 份 编 号 十孔盒包装
免 DNA 提取溶液 A 成分一 130985a1 30 uL（白盖）
免 DNA 提取溶液 A 成分二 130985a2 60 uL（本色盖）
免 DNA 提取溶液 B 130985b 300 uL（红盖）

自备试剂 LAMP 模板、RT-LAMP 模板及 LAMP 引物

使用方法

 1. 制备DNA或RNA样品：用合适的DNA或RNA提取试剂盒提取样品DNA或RNA。本试剂盒含免DNA提取试剂盒试用装（足够处理30个样品）。具体操作见使用方法后的

引物混合液。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积大于或小于1mL，

则各成分的用量请按比例调整。此混合液可以在-20℃放置2年。

引物名称 母液浓度 加入量 在混合液中浓度

FIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

BIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

F3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

B3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

Loop F 100 uM 20 uL 2 uM

Loop B 100 uM 20 uL 2 uM

超纯水 780 uL

3. 在新的反应管中设置LAMP反应（PC为阳性对照、NC1为不加模板阴性对照、NC2为不加引物阴性对照。注意：为便于可视化颜色比较，每次实验必须设置至少一个阴性对照。本试剂盒只提供LAMP的阳性对照模板，不提供RT-LAMP的阳性对照模板）：

成份 样品管 PC NC1 NC2

2×可视化 LAMP MagicMix 10 uL 10 uL 10 uL 10 uL

自备 5×LAMP 引物混合液 4 uL - 4 uL -

自备模板 DNA 或 RNA 1-100ng - - -

LAMP 阳性对照模板-引物混合物 - 4.5 uL - -

补超纯水到 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL

4. 混匀，此时反应液呈现非常淡的蓝色。置于60-65℃保温60-120分钟（具体最佳温度跟用户设计的LAMP引物序列相关，一般选择63℃。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，建议覆盖30uL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。

5. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。

6. 观察实验结果。将反应管放置在白色背景前观察，观察反应液颜色。阳性对照（PC）将呈现淡蓝色，无模板和无引物阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（左边为阴性，右边为阳性）：

7. 如果结果不明确，则需要电泳确认：取扩增产物5 uL跟上样液（loadingbuffer）混合后上样，出现LAMP特征性电泳图谱则表示有扩增。由于电泳需要打开反应管的盖子，非常容易污染实验环境，所以LAMP电泳区域必须跟反应设置区域分开。

8. 结果分析：如果阳性对照能够扩增而阴性对照不能扩出，则实验有效。如果阳性对照没有扩增出条带，则试剂盒的问题，请跟厂家联系。如果阴性对照出现扩增条带，则说明LAMP样品或试剂被上次扩增产物污染，需要注意操作的规范性，最好重新设计针对另一区域的新引物。

附录：免DNA提取操作步骤

1. 配制免 DNA 提取溶液 A 工作液 1mL（足够 10 个样品，如果待测样品数量为其他数字，各成份用量需要相应调整）：在一干净塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即得1mL 溶液 A 工作液。处理一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液。没用完的溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。

2. 对检测基因组 DNA，按参考下取样到一干净的塑料离心管中（对表中未列

出的植物，用户需要自己摸索最佳用量）：

样品种类 取用量

动物组织 1-5 mg

鼠尾 2mm 长

血液样品 不超过 20 uL

植物叶片 1-5 mg，多酚多醌植物不要超过 0.5mg

植物种子（去皮） 1-5 mg

细菌或酵母培养物 0.2-0.5mL 培养物的沉淀

3. 加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保样品被溶液淹埋。95℃保温 10 分钟。

4. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得细胞裂解液，放冰上待用。每次 LAMP 扩增取 1-2uL 细胞裂解液当模板即可。如果细胞裂解液暂时不用，可以放-20℃长期保存。